Biopsia muscular

1. Biopsia a cielo abierto del deltoides o músculo vasto lateral. Se realizará bajo sedación y sin anestesia local. A través de una incisión no menor de 2 cm sin pinzamientos ni ligaduras para obtener una muestra de tejido de aproximadamente 3 mm x 3 mm x 3 mm (25 mg) en paralelo a la longitud de la fibra muscular.
2. Se debe seleccionar la parte media del haz muscular evitando los extremos de inserción tendinosa en donde normalmente hay mucha variación de las fibras y numerosos núcleos centrales que pueden ser erróneamente interpretados.
3. La muestra debe ser envuelta en una gasa humedecida con suero salino y transportada inmediatamente al laboratorio.
4. División de la muestra en varios fragmentos con ayuda de un bisturí fino, que serán utilizadas para diferentes técnicas.
5. Proceso inmediato de montaje y congelación

PONER EN LA PETICIÓN ENVIADA AL LABORATORIO:

Muestras para:

• Análisis histológico, histoquimico y estudio Inmunohistoquímico
• Análisis enzimáticos de los complejos de la cadena respiratoria
• Para posteriores Estudios genéticos  (conservar muestra congelada en nitrógeno líquido y almacenada a – 80ºC

Análisis histológico, histoquimico y estudio Inmunohistoquímico

Tinciones y microscopia óptica

• Hematoxilina y eosina
• Tricromo de Gomori modificado (GT)
• Nicotinamida adenina dinucleótido-tetrazolio reductasa (NADH-TR
• Deshidrogenasa succínica (SDH)
• Citocromo oxidasa (COX)
• COX-SDH
• Adenosina trifosfatasa (ATPasas a la preincubación pH 10,4, 4,6, 4,3)
• Fosfatasa ácida
• Aceite rojo O (ORO)
• Ácido periódico-Schiff (PAS) con diastasa (DPAS)

Tinciones adicionales

• Fosforilasa = glucogenosis tipo V (enfermedad de McArdle)
• Fosfofructoquinasa = glicogenosis tipo VII (enfermedad de Tarui)

Análisis espectrofotométrico de la actividad de los Complejos I, II, III y IV de la cadena respiratoria mitocondrial.

Cuantificación Cadenas Respiratorias en muestras de biopsia muscular

• En muestras de tejido congeladas, se analiza la actividad de los complejos de la cadena respiratoria I, II, III y IV individualmente y se compara estas actividades a la actividad del marcador de la matriz mitocondrial, la enzima citrato sintasa. Un indicador de la masa mitocondrial dentro de la muestra.
• La muestra NO debe ser inferior a 60 gramos (pepita de naranja)
• Se envuelve en una gasa humedecida con suero fisiológico y se introduce en un recipiente con hielo.
• Introducir la muestra en un criotubo. Antes de que transcurran 10 minutos la muestra debe ser congelada con nitrógeno líquido y guardad en nieve carbónica o en un congelador a – 80º

Prof. Dr. Fernando Galan